Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展减慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现显露来呼吸道自身抗纤到显现显露来1型号冠心病临床病症的困难重重率在青少年后期就有很好的揭示，多个呼吸道自身抗纤非典型的青少年以前有70%在肝细胞转换后10在短期内患上冠心病，而随访15年的青少年这一百分比增加到84%。相对于之下，占临床1型号冠心病一半以上的型号1型号冠心病的胃癌必要还无法给予应有的统计分析方法。

越来越多的人开始适用分期系统来判别1型号冠心病的困难重重：个纤在显现显露来多种呼吸道自身抗纤时离开第1下一阶段，显现显露来血糖显现显露来异常时离开第2下一阶段，显现显露来病症时离开第3下一阶段。一些多发呼吸道自身抗纤非典型的个纤，在1期和2期，困难重重较更慢，并发展为胃癌的1型号冠心病。我们以前揭示了一一组在首次测定到多种呼吸道自身抗纤比对后至亦非多10年无冠心病的亦非更慢困难重重者，这一组病患人数亦非多，但特质颇为明确。随后，我们发现呼吸道自身肝细胞特异性CD8+T蛋白质催化在困难重重缓更慢的病患以前基本不实际上，但在现下一阶段胃癌和长期实际上的冠心病病患以前很较易测定到。这意味著得显露论据，与困难重重病患相对于，这些病患自身抗纤的调节增强。

更早统计分析方法得显露论据，尽管调节性T蛋白质(Treg)数目正常，但冠心病病患实际上一些功能性缺陷，其以前包括对IL-2的催化能力也降低。此外，冠心病病患以前的振荡CD4+T蛋白质意味著对调节增添抵抗性，显显露为振荡T蛋白质的选择性减慢，自然转化成的Treg和纤外转化成的诱导Treg，以及肝细胞经历的CD4+T蛋白质以前IL-2催化减慢。本统计分析方法的旨在是揭示了CD4+调节性T蛋白质(Treg)在一小群亦非缓更慢困难重重者以前的特质，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX统计分析方法是一项以年轻人为基础的纵向统计分析方法，在21岁以下肺炎的病患亲属以前检查1型号冠心病的危险性因素。我们以前揭示了长期缓更慢困难重重者的特质，他们保证多重呼吸道自身抗纤非典型超过10年，但无法显现显露来冠心病的临床病症，更慢性或非展开性自身免疫。随后，10名继续保证无冠心病并乐意提供大量血液比对的缓更慢困难重重者纳入T和B蛋白质功能性分析方法。在目前的统计分析方法以前，8名更慢困难重重者(SP一组)，以前位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的呼吸道自身抗纤非典型。所有的发起者都属于1型号冠心病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身抗纤对某些肝细胞的非典型催化，然而，一名病患已经属于2期至亦非多6年，但无法显现显露来临床病症，一名病患被诊断为冠心病，该受试者72岁，在热带植物实验比对时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在统计分析方法以前对该供纤展开了原则上评估。复合外周血单个核催化蛋白质(PBMCs)，采用多匹配流式蛋白质练成和T蛋白质选择性试验性评估供纤以前Treg的kHz、表观号和功能性。适用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和转回)展开无监理聚类分析方法，评估Treg表观号。

结果：与健康供纤相对于，来自更慢困难重重纤的失忆CD4+T蛋白质的监理聚类看显露，激活的失忆CD4+ TregkHz增加，与阿托品诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表示增加有关。一名HbA1c下降时的病患与困难重重缓更慢者和匹配的相对于较一组相对于，Treg曲谱相同。功能性分析方法得显露论据，与健康供纤相对于，来自缓更慢困难重重纤的Treg内皮细胞的CD4+振荡T蛋白质选择性相对来说受损。显显露为对振荡CD4+T蛋白质CD25和CD134表示的选择性增加。

左图1 集中的表观号分析方法看显露，CD4+Treg亚型号在更慢困难重重配置文件以前增加。由FlowSOM转化的Treg过道，涌进在来自所有供纤的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据上面物表示断定显露10个元簇:失忆T蛋白质_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T蛋白质;HLA-DR + GITR +失忆T蛋白质;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)适用9个有所不同Treg上面转化的10个元簇的MST。每个路由表值得一提的是一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在路由表一组周围上色。每个路由表以前的饼左图说明单个上面的表示高级别。(b)每个元聚类的热左图，以看显露整纤上面表示。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)转化左图，以及FlowSOM辨识的每个元簇的表层。(e-l)相对于较丰度为每个metacluster木箱终点站左图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP一组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T蛋白质(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T蛋白质(l)。蓝色带子值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 适用CITRUS的预测模型号证实，TregkHz的增加是困难重重缓更慢的红色。基准门控(a - f)和柑橘分析方法(g-k)非常SP发起者和匹配的HD发起者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的有所不同。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的值得一提的是性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表示展开复合，模拟器FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)一组以及供纤SP 606(蓝色)以前CD25+ cd127的kHz核催化心内容左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的木箱终点站左图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)龙眼簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示低压后处理，箭头突显露的簇被辨识为SP和HD配置文件彼此之间的有所不同。(j)木箱终点站左图看显露了在SP(黑纹)和HD(灰点)一组以前，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相对于较丰度(百分比)。(k)直方左图看显露每个簇的表观号(黄色)和Treg上面相对于较表示与文化背景表示(深蓝色);上列，CPUTreg_3;下面几天后，CPUTreg_4。文化背景与所有其他簇以前上面的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验

左图3 与健康献血者相对于，困难重重缓更慢者失忆treg的GITR增加。每个失忆CD4+T蛋白质元簇(失忆T蛋白质_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T蛋白质;HLA-DR + GITR +失忆T蛋白质;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个表示上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的表示热左图(sp606不包括在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇以前所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR表示串接，看显露直方左图(c)和核催化心内容左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和化验，p< 0.07(蓝色)所有供纤包括，p< 0.05(深蓝色)供纤SP 606和匹配的HD不包括在测试以前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs以前GITR表示，从基准门控，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(蓝色)串接，看显露直方左图(e)和核催化心内容左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩化验

左图4 来自缓更慢困难重重的CD4+ treg蛋白质高度集中振荡CD4+T蛋白质的能力也降低。SP一组用深蓝色的终点站和带子说明，HD一组用蓝色的终点站和带子说明，蓝色的终点站/带子说明供纤sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质展开分选。CD4+CD25−(转发者)被上面为CFSE, Treg按观察的百分比催化物。用抗CD3 /28微珠抑制蛋白质，培训3过后展开流式蛋白质练成测定。(a-d)与CD4+转发者相对于较应的treg培训(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培训。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE选择性倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性倍数。适用非典型相对于较(激活的一组织起来蛋白质下同treg)计算选择性倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

左图5 振荡CD4+T蛋白质对缓更慢困难重重的T蛋白质抑制的选择性更敏感。SP一组用深蓝色的终点站和带子说明，HD一组用蓝色的终点站和带子说明，蓝色的终点站/带子说明供纤sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质展开分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel上面，treg按观察的百分比催化物。用抗CD3 /28微珠抑制蛋白质，培训3过后展开流式蛋白质练成(CD25反染)和蛋白质因子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培训。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE选择性百分率(b)。(c,d) CD25选择性百分率(c)和CD134选择性百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训以前的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

论据：我们得显露的论据是，来自缓更慢困难重重子的抑制失忆CD4+Treg在GITR表示以前给予了扩展和独特，强调了实质性统计分析方法Treg在1型号冠心病风险个纤以前的系统性的全面性。

原文显露处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28