Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的现实生活中逐渐扩展

从第一次消失人质内自身突变到消失1同型肾病病理病因的的发展率在孩童时期就有很好的揭示，多个人质内自身突变乙型肝炎的孩童中所有70%在血清转换后10年内患上肾病，而随访15年的孩童这一%减更少到84%。相相当之下，占病理1同型肾病一半以上的同型1同型肾病的胃癌前提还未给予充分的统计学。

更多的人开始常用分期系统对来度量1同型肾病的的发展：个质在消失多种人质内自身突变时进入第1之后，消失血糖异常时进入第2之后，消失病因时进入第3之后。一些多发人质内自身突变乙型肝炎的个质，在1期和2期，的发展较慢速，并发展为胃癌的1同型肾病。我们之后揭示了三组成员在首次扫描到多种人质内自身突变采样后至更少10年无肾病的快得多速的发展者，这组成员患儿伤亡人数更少，但大体上特征非常明确。随后，我们发现人质内自身上皮细胞酪氨酸CD8+T肝细胞重排将在的发展极快的患儿中所大体上不存在，但在近期胃癌和值得注意的肾病患儿中所很较易扫描到。这可能表明，与的发展患儿相相当，这些患儿自身免疫重排将的调节增强。

早期统计学表明，尽管调节性T肝细胞(Treg)量短时间，但肾病患儿存在一些功能毛病，其中所还包括对IL-2的重排将控制能力减小。此外，肾病患儿中所的振荡将CD4+T肝细胞可能对调节更具抵抗性，展示出为振荡将T肝细胞的消除移向，自然显现出的Treg和肾脏显现出的作用于Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T肝细胞中所IL-2重排将移向。本统计学的借此是揭示了CD4+调节性T肝细胞(Treg)在一个大极极快的发展者中所的大体上特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX统计学是一项以人群为基础的斜向统计学，在21岁以下确诊的患儿亲属中所安全检查1同型肾病的危险因素。我们之后揭示了曾一度极快的发展者的大体上特征，他们保持多重人质内自身突变乙型肝炎最多10年，但未消失肾病的病理病因，慢速性或非透过性自身免疫。随后，10名再次保持无肾病并想要提供大量血液采样的极快的发展者纳入T和B肝细胞功能分析。在目前的统计学中所，8名慢速的发展者(SP组成员)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的人质内自身突变乙型肝炎。所有的自发性都处于1同型肾病的发展的1期，尽管一些人随后失去了人质内自身突变对某些上皮细胞的乙型肝炎重排将，然而，一名患儿已经处于2期至更少6年，但未消失病理病因，一名患儿被病患为肾病，该受试者72岁，在采集检验采样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在统计学中所对该NAD透过了单独评估。复合外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞心法和T肝细胞消除试验评估NAD中所Treg的Hz、遗传和功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和回归)透过无全权负责聚类分析，评估Treg遗传。

结果：与身质健康NAD相相当，来自慢速的发展质的知觉CD4+T肝细胞的全权负责聚类标示出，作用于的知觉CD4+ TregHz减更少，与组胺作用于的TNFR相关酶(GITR)问到减更少有关。一名HbA1c升高的患儿与的发展极快者和匹配的相异组成员相相当，Treg谱有所有所不同。功能算出结论，与身质健康NAD相相当，来自极快的发展质的Treg介导的CD4+振荡将T肝细胞消除一般来说来说受损。展示出为对振荡将CD4+T肝细胞CD25和CD134问到的消除减更少。

平面图1 深入的遗传分析标示出，CD4+Treg亚同型在慢速的发展数据流中所减更少。由FlowSOM分解的Treg会议室，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标上物问到检验出10个元簇:知觉T肝细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T肝细胞;HLA-DR + GITR +知觉T肝细胞;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)常用9个有所不同Treg标上分解的10个元簇的MST。每个路由表推选一个战略性(100个战略性)，更大的元战略性(10个元战略性)在路由表组成员周遭上色。每个路由表中所的饼平面图问到单个标上的问到行政级别。(b)每个元聚类的热平面图，以标示出整质标上问到。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)分解平面图，以及FlowSOM辨别的每个元簇的裂口。(e-l)一般来说稀土元素为每个metacluster箱中所央线平面图(稀土元素> 0.05%)断定为HD和SP组成员:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T肝细胞(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T肝细胞(l)。粉红色左上角推选**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 常用CITRUS的预测模同型证实，TregHz的减更少是的发展极快的标志。分级旁路(a - f)和柑橘分析(g-k)相当SP自发性和匹配的HD自发性在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的推选性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR问到透过复合，建模FlowSOM群质。(b) HD(黑点)和SP(白点)组成员以及NADSP 606(粉红色)中所CD25+ cd127的Hz汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路姪集的箱中所央线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)棉花簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3问到强度着色，箭头凸显的簇被辨别为SP和HD数据流错综复杂的有所不同。(j)箱中所央线平面图标示出了在SP(白点)和HD(灰点)组成员中所，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的一般来说稀土元素(%)。(k)直方平面图标示出每个簇的遗传(粉红色)和Treg标上一般来说问到与取材问到(白色);上列，内核Treg_3;下面偷偷地，内核Treg_4。取材与所有其他簇中所标上的问到有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩检验

平面图3 与身质健康献血者相相当，的发展极快者知觉treg的GITR减更少。每个知觉CD4+T肝细胞元簇(知觉T肝细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T肝细胞;HLA-DR + GITR +知觉T肝细胞;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个问到标上的巨大变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的问到热平面图(sp606不还包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR问到串联，标示出直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon匹配符号秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有NAD还包括，p< 0.05(白色)NADSP 606和匹配的HD不还包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR问到，从分级旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(粉红色)串联，标示出直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配符号秩检验

平面图4 来自极快的发展的CD4+ treg肝细胞控制振荡将CD4+T肝细胞的控制能力减小。SP组成员用白色的中所央线和左上角问到，HD组成员用红色的中所央线和左上角问到，粉红色的中所央线/左上角问到NADsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(应将答者)被标上为CFSE, Treg按观察的%滴定。用抗CD3 /28微珠作用于肝细胞，培育3天后透过流式肝细胞心法扫描。(a-d)与CD4+应将答者一般来说应将的treg培育(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应将答者培育。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE消除倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除倍数。常用乙型肝炎相异(作用于的响应将肝细胞都有treg)计算消除倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

平面图5 振荡将CD4+T肝细胞对极快的发展的T肝细胞作用于的消除更引人注意。SP组成员用白色的中所央线和左上角问到，HD组成员用红色的中所央线和左上角问到，粉红色的中所央线/左上角问到NADsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(应将答者)被cfsel标上，treg按观察的%滴定。用抗CD3 /28微珠作用于肝细胞，培育3天后透过流式肝细胞心法(CD25反染)和肝细胞因姪分析。HD Treg与HD、SP或sp606应将答者共同培育。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE消除%-(b)。(c,d) CD25消除%-(c)和CD134消除%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在大一中所的问到。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

论据：我们算出的论据是，来自极快的发展姪的作用于知觉CD4+Treg在GITR问到中所给予了扩展和多样，忽略了再进一步统计学Treg在1同型肾病高风险个质中所的表型的必要性。

原意出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28